試驗背景
核酸檢測技術已成為血液篩查實驗室的重要實驗手段,但因其靈敏度高的特點,同時實驗室也容易受到污染,特別是核酸的氣溶膠污染比較嚴重。
在新冠病毒核酸檢測過程中,常見以下幾種污染類型:擴增片段的污染(產物污染);天然基因組 DNA的污染、試劑污染(貯存液或工作液)以及樣本間交叉污染。
核酸檢測實驗室污染的主要來源是擴增產物的污染。 目前國內所有二級以上綜合醫院都具備了核酸檢測能力,大部分醫院也設立了PCR 實驗室,高強度的核酸檢測任務已成為了檢驗員的工作常態,如果一旦出現實驗室核酸污染,可能會造成假陽性的結果,導致結果不可信,甚至可能會危及實驗室工作人員安全。 核酸實驗室污染后難以清除,有可能造成實驗室不能使用的風險。
如果一旦出現核酸實驗室污染,除了常規的清潔消毒方法之外,還可以進行通過空間滅菌方法進行核酸清除試驗。
在新冠病毒核酸檢測過程中,常見以下幾種污染類型:擴增片段的污染(產物污染);天然基因組 DNA的污染、試劑污染(貯存液或工作液)以及樣本間交叉污染。
核酸檢測實驗室污染的主要來源是擴增產物的污染。 目前國內所有二級以上綜合醫院都具備了核酸檢測能力,大部分醫院也設立了PCR 實驗室,高強度的核酸檢測任務已成為了檢驗員的工作常態,如果一旦出現實驗室核酸污染,可能會造成假陽性的結果,導致結果不可信,甚至可能會危及實驗室工作人員安全。 核酸實驗室污染后難以清除,有可能造成實驗室不能使用的風險。
如果一旦出現核酸實驗室污染,除了常規的清潔消毒方法之外,還可以進行通過空間滅菌方法進行核酸清除試驗。
試驗對象
中科檢測可以針對核酸去除劑、核酸清除劑、核酸降解劑、核酸降解儀等核酸清除產品檢測,開展核酸氣溶膠污染的空氣清除試驗檢測。
試驗方法
1.核酸清除試驗檢測設備
3m3試驗艙、二級生物安全柜、熒光定量PCR儀、渦旋混勻器、低溫冰箱、低溫高速離心機、PCR專用微量移液器、水浴鍋。
2. 核酸清除試驗試劑耗材
病毒DNA/RNA提取試劑盒、ASFV基因質粒熒光定量qPCR試劑盒、TE緩沖液、96~100%乙醇、超純水、去RNA酶水、PBS溶液等。
3. 核酸清除試驗步驟
1)樣品配制:根據客戶要求倍比稀釋,待用;
2)將稀釋好的核酸降解劑加入到消毒噴霧設備中,將設備放入3m3試驗艙中,連接電源并設置好噴霧程序,待用;
3)試驗樣品的制備:在對照組和樣品組植絨棉簽上各加50μL陽性對照,固定在EP管架上待其自然風干;
4)將其中對照組植絨棉簽放置在室溫下(不熏蒸),樣品組植絨棉簽固定在EP管架上放入試驗艙中,關緊艙門;
5)通過橡膠手套按下消毒噴霧設備的啟動鍵,噴霧10min,待噴霧結束后開始計時;
6)靜置密閉2h后,通過傳遞艙將試驗組的植絨棉簽取出,開啟凈化30 min;
7)將每支植絨棉簽在1mL離心管中各自用1mLTE緩沖液進行洗脫,取200μuL進行核酸提??;
8)配制標準曲線,然后進行qPCR試驗。
4. 結果計算
3m3試驗艙、二級生物安全柜、熒光定量PCR儀、渦旋混勻器、低溫冰箱、低溫高速離心機、PCR專用微量移液器、水浴鍋。
2. 核酸清除試驗試劑耗材
病毒DNA/RNA提取試劑盒、ASFV基因質粒熒光定量qPCR試劑盒、TE緩沖液、96~100%乙醇、超純水、去RNA酶水、PBS溶液等。
3. 核酸清除試驗步驟
1)樣品配制:根據客戶要求倍比稀釋,待用;
2)將稀釋好的核酸降解劑加入到消毒噴霧設備中,將設備放入3m3試驗艙中,連接電源并設置好噴霧程序,待用;
3)試驗樣品的制備:在對照組和樣品組植絨棉簽上各加50μL陽性對照,固定在EP管架上待其自然風干;
4)將其中對照組植絨棉簽放置在室溫下(不熏蒸),樣品組植絨棉簽固定在EP管架上放入試驗艙中,關緊艙門;
5)通過橡膠手套按下消毒噴霧設備的啟動鍵,噴霧10min,待噴霧結束后開始計時;
6)靜置密閉2h后,通過傳遞艙將試驗組的植絨棉簽取出,開啟凈化30 min;
7)將每支植絨棉簽在1mL離心管中各自用1mLTE緩沖液進行洗脫,取200μuL進行核酸提??;
8)配制標準曲線,然后進行qPCR試驗。
4. 結果計算